温阳散寒除湿法对类风湿关节炎Th17/Treg细胞平衡调控作用及机制的研究(4)

　　3.4 蠲痹颗粒醇提物对CIA模型小鼠Treg/Th17平衡调控作用的影响

　　流式细胞术检测脾淋巴细胞CD4+ T细胞内的IL-17A表达情况。结果显示，与CIA模型对照组比较，蠲痹颗粒干预后，其IL-17A表达显著下调，差异有显著性意义（P＜0.05）。Treg/Th17比值反应Treg/Th17平衡状态，结果显示，蠲痹颗粒干预后，显著增加Treg/Th17比值，差异有显著性意义（P＜0.05）。

　　图4. 温阳散寒除湿法对CIA模型小鼠CD4+ T细胞胞内IL-17A表达的影响

　　各组1×106个小鼠脾淋巴细胞与PMA、Ionomycin以及BFA于5%CO2培养箱中共培养4h后，收集细胞，封闭FcR，进行表面标志染色。完毕后，固定、穿膜，加入荧光标记的抗IL-17、抗体，流式细胞仪检测分析。结果以mean±SD.表示。*P<0.05，**P<0.01，对照组vs蠲痹颗粒醇提物干预组

　　3.5 蠲痹颗粒醇提物对CIA模型小鼠Th17相关基因表达的影响

为进一步揭示蠲痹颗粒醇提物对Th17调控作用的机制，我们应用荧光定量PCR检测Th17相关基因表达水平，结果显示蠲痹颗粒醇提物显著抑制CIA模型小鼠脾淋巴细胞IL-17A、IL-17F、IL-21和IL-23p19的mRNA的表达水平，下调Th17转录因子RORgt的转录水平，差异有显著性意义（P＜0.05）。

　　图4. 温阳散寒除湿法对CIA模型小鼠细胞Th17细胞相关基因表达的影响

　　抽提1×107个小鼠脾淋巴细胞，提取总RNA，逆转录合成cDNA。应用SYBR嵌合荧光法在实时定量PCR仪进行Th17细胞相关基因表达检测。结果以mean±SD.表示。*P<0.05，**P<0.01，对照组vs蠲痹颗粒醇提物干预组